目的:研究Runx3/AML2/Cbfa3对不同阶段胚胎肢芽干细胞在骨骼形成过程中的作用。 方法:在体外应用免疫组化、实时定量RT-PCR和Western blot技术分别检测TGF-β和BMP-2干预和不干预的小鼠胚胎肢芽干细胞,观察Runx3的表达情况。应用逆转录转染技术在间充质干细胞祖细胞超表达Runx3,进而观察其对不同时期软骨细胞标记物的影响。 结果:在软骨细胞成熟过程中Runx3的两个亚型呈两阶段表达,MASDS亚型在早期软骨细胞分化中高表达,而MRIPV亚型在肥大软骨细胞时期亦有高表达。总之,在肢芽干细胞成熟过程中,Runx3一直有表达。在肢芽干细胞微团培养液中应用BMP-2可在早期诱导Runx3、ALP和Osteocalcin的表达,并且之后呈持续性升高,但BMP-2可抑制SOX9的表达。TGF-β 能有效抑制Runx3、ALP和Osteocalcin的表达,但其在软骨形成早期阶段可诱导SOX9的表达。病毒介导的Runx3在小鼠胚胎间充质干细胞的超表达即可有效诱导早期软骨细胞分化标记物ALP的表达,后期也可诱导肥大型软骨细胞标记物colX和osteocalcin的产生,这一作用与Runx2相似。 结论:结果显示Runx3在软骨形成及软骨细胞成熟的一系列过程中具有持续的直接的作用。