[目的]
观察大黄牡丹汤对脓毒症大鼠肺损伤的作用,并探讨其可能的作用机制。
[方法]
采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP))的方法复制脓毒症模型,将42只健康雄性SD大鼠随机分为5组,分别为:正常对照组(n=6)、假手术组(n=6)、模型组(n=10)、乌司他丁组(n=10)、大黄牡丹汤组(n=10)。假手术组开腹轻扰肠管后关腹,CLP组、乌司他丁组、大黄牡丹汤组均为脓毒症肺损伤模型。各组分别在术前三天给予干预药物,正常对照组、假手术组及模型组给予蒸馏水2ml/只/d灌胃;乌司他丁组给予5.0×104U/kg,q.d腹腔注射;大黄牡丹汤组给予大黄牡丹汤2ml/只/d灌胃。CLP术于最后一次药物干预2h后进行,术后观察大鼠一般情况,并于术后6小时,取大鼠腹主动脉血,离心后取上清液,并取肺组织备测。用ELISA法检测血清中NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-10的水平,免疫组织化学法检测大鼠肺组织NF-κB的表达,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,肺组织经HE染色后在光镜下观察肺脏病理形态学的改变。对所得数据进行统计分析。
[结果]
1.比色法检测MPO活性结果:模型组MPO活性较正常对照组及假手术组显著升高(P<0.01);大黄牡丹汤组和乌司他丁组MPO活性均较模型组显著降低(P<0.01),大黄牡丹汤组与乌司他丁组相比,MPO活性差异无统计学意义(P>0.05)。
2.肺组织病理学结果:HE染色光镜下观察到正常对照组及假手术组大鼠肺组织结构完整,肺泡间隔无水肿,肺泡腔清晰;模型组肺泡间隔增宽,肺间质、肺泡充血,水肿,肺泡腔及肺间质可见大量炎性细胞浸润;大黄牡丹汤组和乌司他丁组改变明显减轻但较正常对照组及假手术组重。
3.ELISA法检测NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-10结果:模型组NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-10水平均较正常对照组及假手术组显著升高(P<0.01);大黄牡丹汤组及乌司他丁组均能明显抑制NF-κB、TNF-α、IL-6水平,上调IL-10水平,与模型组相比具有统计学意义(P<0.01,P<0.05),其与乌司他丁组相比,NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。
4.免疫组织化法法检测NF-κB结果:正常对照组及假手术组均可见少量散在的NF-κB阳性免疫反应产物,呈弱阳性表达,主要位于胞浆中,模型组可见较多NF-κB阳性免疫反应产物,呈棕黄色,主要位于细胞核中,NF-κB阳性面积比值较正常对照组及假手术组明显升高(P<0.01);大黄牡丹汤组及乌司他丁组NF-κB阳性免疫反应产物也主要位于细胞核,但表达强度较模型组降低,大黄牡丹汤组及乌司他丁组NF-κB的阳性面积比值与模型组比较有统计学意义(P<0.01,P<0.05);大黄牡丹汤组与乌司他丁组相比,其结果无统计学意义(P>0.05)。
[结论]
1.CLP法能够成功复制大鼠脓毒症模型。
2.大黄牡丹汤可以抑制肺组织MPO活性,减轻肺组织病理改变,保护肺组织。通过抑制NF-κB在脓毒症大鼠血清及肺组织中的表达,从而下调血清中促炎介质水平,上调抗炎介质水平,促进免疫平衡,可能是其发挥作用的机制之一。