目的:探讨诱导自噬与TGF-β1促进HSC活化机制的关系. 方法:分离培养急性肝损伤和正常mHSC,MDC染色观察不同培养时间自噬小体的表达变化.采用TGF-β1干预小鼠HSC株JS-1,自噬抑制剂CQ、3-MA及siAtg7干扰抑制自噬.BODIPY染色观察mHSC脂滴变化,MTT检测细胞活性,Western blot和RT-PCR检测HSC活化指标(α-SMA和Col.1)、自噬指标(LC3B、p62、Beclin1、Atg5、Atg7)、凋亡指标(Cleaved-Caspase3、Bcl-2、p21、p53)的表达,RFP-GFP-LC3B转染观察自噬小体的表达. 结果:CCl4诱导的急性肝损伤模型mHSC、LC3BⅡ蛋白表达明显增加;正常mHSC分离后随培养天数的增加,MDC染色胞质内蓝色荧光小点表达明显增加.TGF-β1刺激JS-1活化并伴自噬水平上调,如LC3BⅡ蛋白(P＜0.05)和Atg5、Beclin1 mRNA的表达增加(P＜0.01),以及胞质内LC3B黄、红荧光小点表达.而抑制自噬能够阻断TGF-β1诱导的JS-1活化.CQ能够抑制TGF-β1诱导的JS-1增殖(P＜0.01)、抑制α-SMA、Col.ⅠmRNA (P＜0.01)和蛋白(P＜0.01、P＜0.05)的表达及细胞内MDC染色蓝色荧光小点的表达.3-MA能够抑制TGF-β1诱导的Col.1蛋白的表达(P＜0.01);siAtg7干扰后能明显抑制TGF-β1诱导的Col.Ⅰ蛋白表达(P＜0.01). 结论:TGF-1可以通过诱导自噬从而激活HSC,抑制自噬能够抑制HSC活化.
(8.0+极速模式)