[第一部分临床研究]
目的:研究清热解毒中药对原发性肝癌患者血清CXCL1 mRNA和蛋白表达的影响。
方法:收集60例受试者，分为正常对照组（24例健康人）和肝癌组（36例原发性肝癌患者），比较两组血清CXCL1 mRNA和蛋白表达情况。同时肝癌组随机分为两组:服用清热解毒中药组（19例）和未服用清热解毒中药组（17例），比较两组血清CXCL1 mRNA和蛋白表达情况。正常对照组与肝癌组均抽血送检，其中肝癌组中的中药组服用清热解毒中药方，每日一剂，每煎200ml，早晚分服，28日为一疗程，连续服用2个疗程，服药2疗程后抽血送检;通过RT-PCR、Western方法检测血清CXCL1的mRNA和蛋白含量，比较正常对照组与肝癌组之间的差异，进一步比较服用清热解毒中药组与未服用清热解毒中药组之间的差异，探讨清热解毒中药对CXCL1 mRNA和蛋白水平的影响。
结果:1.正常对照组、肝癌组两组血清CXCL1 mRNA水平差异有统计学意义(P＜0.01)，正常对照组显著低于肝癌组;服用清热解毒中药组与未服用清热解毒中药组比较，CXCL1 mRNA水平差异有统计学意义(P＜0.01)，服用清热解毒中药组显著低于未服用清热解毒中药组。2.正常对照组、肝癌组两组血清CXCL1蛋白水平差异有统计学意义(P＜0.01)，正常对照组显著低于肝癌组;服用清热解毒中药组与未服用清热解毒中药组比较，CXCL1蛋白水平差异有统计学意义(P＜0.01)，服用清热解毒中药组显著低于未服用清热解毒中药组。
结论:原发性肝癌患者血清CXCL1的mRNA、蛋白水平高于健康人的表达，清热解毒中药方可以显著下调肝癌患者血清中CXCL1的mRNA含量和蛋白的表达。
[第二部分实验研究]
目的:观察CXCL1 RNAi对肝癌细胞增殖，凋亡及成瘤的影响，并观察其对介导的炎症信号通路(NF-κB65/HIF-1α/STAT-3)及其他趋化因子CXCL2、IL-1β、CXCL3的影响。
方法:通过慢病毒干扰载体构建SiRNA，观察RNAi对细胞增殖、凋亡、成瘤的影响。分别通过RT-PCR、Western blot方法，观察其对介导的炎症信号通路(NF-κB65/HIF-1α/STAT-3)及其他趋化因子CXCL2、IL-1β、CXCL3的影响。
结果:1.慢病毒干扰载体构建及验证:分析CXCL1 mRNA检测结果，与空白对照组、空载体组、干扰NC组相比，CXCL1干扰低剂量组、CXCL干扰中剂量组、CXCL1干扰高剂量组的CXCL1 mRNA表达量明显减少，随着干扰剂量增加，CXCL1 mRNA表达呈逐渐下降趋势，差异有统计学意义(P＜0.05)，表明慢病毒干扰载体构建成功。2.CXCL1 RNA干扰对肝癌细胞增殖、凋亡及成瘤的影响:①CCK-8法:随着干扰剂量的增加、干扰时间的延长，CXCL1 RNA干扰抑制细胞增殖的作用更加明显，有统计学差异(P＜0.01)。流式细胞仪检测结果表明随着干扰剂量的增加、干扰时间的延长，G1期细胞数量增加，S期细胞的数量减少，阻滞细胞增长于G1期。②流式细胞术及Tunel实验结果表明，与对照组相比，CXCL1慢病毒干扰组的细胞凋亡明显增多，且随着干扰浓度增加、时间延长，细胞凋亡率也逐渐增加。③成瘤组数据结果表明实验组(shCXCL1组)的瘤重明显低于对照组，生长速度受到抑制(P＜0.01)，对肿瘤生长有抑制作用。3.通过PCR、westernblot检测，CXCL1 RNA干扰使CXCL2、IL-1β、CXCL3等其他趋化因子的mRNA、蛋白明显低于对照组、干扰模型组，说明CXCL1 RNA干扰显著影响其他趋化因子的mRNA、蛋白表达。4.在对相关信号通路的影响:经PCR检验，CXCL1 RNA干扰导致HIF-1α、STAT3、NF-κB65随着时间(0h，12h，24h，36h，48h)的变化及干扰剂量（对照组、干扰低剂量组、干扰中剂量组、干扰高剂量组）的增加，mRNA表达逐渐降低，说明CXCL1 RNA干扰可明显抑制相关信号通路的活化。经western blot检测结果，随着干扰时间的延长，STAT-3、NF-κB65、HIF-1α在被抑制后，有激活的表现，与对照组相比，呈现明显降低的趋势，在同一被干扰时间段内，随着干扰剂量的增加，STAT-3下降趋势较为明显，NF-κB65、HIF-1α在被抑制后有被激活，可见，时间因素和剂量因素都可以影响相关信号通路的表达。
结论:RNAi介导CXCL1可抑制肝癌细胞增殖、促进凋亡，抑制肿瘤生长;随着干扰时间的延长、干扰剂量的增加，对介导的炎症信号通路（NF-κB/HIF-1α/STAT-3）具有不同程度的抑制作用，抑制其他趋化因子CXCL2、IL-1β、CXCL3的表达。
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