目的:
研究丹参酮ⅡA对AOM/DSS诱导C57BL/6小鼠自发炎症性大肠癌模型的影响。
方法:
1.以人大肠癌细胞HCT-116、LoVo为研究对象。将丹参酮ⅡA作用于人肠癌细胞HCT-116、LoVo，采用CCK法来检测丹参酮ⅡA对人肠癌细胞的生长抑制作用。
2.AOM/DSS诱导小鼠大肠癌模型构建:模型组给予C57BL/6小鼠腹腔注射AOM12.5mg/kg，分别于AOM腹腔注射后第5天、26天、47天给予含2.5％DSS的诱发水持续5天后，更换蒸馏水，期间测量小鼠体重，观察饮水和进食量，小鼠一般状态，第90天，处死小鼠取结直肠标本，观察结直肠肿瘤形成情况;HE染色检测组织病理情况;免疫组化检测BrdU、p-STAT3、COX-2表达情况。
3.丹参酮ⅡA及阿司匹林干预实验:AOM腹腔注射前一周，将动物随机分成6组，每组12只，分别为对照组、模型组、丹参酮ⅡA低、中、高剂量组(25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d)和阿司匹林组（人给药剂量的6倍）。并通过丹参酮ⅡA及阿司匹林饲料喂食干预C57BL/6小鼠，直到第90天处死取材，观察各组肿瘤形成情况，解剖小鼠分离结直肠，体视显微镜下观察结直肠肿瘤大小，并用游标卡尺测量计数，对实验组和对照组小鼠结直肠组织中瘤体的数目、面积、形态进行评价;HE染色检测组织病理情况;免疫组化检测BrdU、p-STAT3、COX-2表达情况。
结果:
丹参酮ⅡA作用于体外培养人肠癌细胞LoVo细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为32.06μmol/L、13.10μmol/L、8.46μmol/L; HCT-116细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为:51.13μmol/L、35.29μmol/L、15.51μmol/L，丹参酮ⅡA随着浓度的增加和作用时间的延长对细胞生长的抑制作用明显增加。
试验期间对照组(n=6)小鼠精神状态良好，毛色光亮柔顺，大便棕黑色，体重逐渐增加（终体重29.12±1.05g），无死亡;模型组小鼠在腹腔注射AOM后死亡4只(33％)，精神状态变差，第一次2.5％DSS水干预后，模型组小鼠体重下降(终体重26.78±2.17g)、毛色变暗，反应迟缓，出现软便、稀水样便。免疫组化结果显示:对照组BrdU阳性细胞数10.45±3.79％、p-STAT3阳性细胞数9.29±3.03％、COX-2阳性细胞数11.62±4.13％;模型组BrdU阳性细胞数65.68±10.45％、p-STAT3阳性细胞数50.84±6.95％、COX-2阳性细胞数78.17±7.42％;模型组较对照组BrdU、p-STAT3、COX-2阳性细胞数明显升高(P=0.000)。
丹参酮ⅡA低、中、高剂量组和阿司匹林组肠48只小鼠肠道肿瘤发生率为100％，对照组肠道无肿瘤发生。药物干预组小鼠与模型组小鼠想比较一般状态较好。药物干预组小鼠终体重分别为:丹参酮ⅡA低剂量组26.84±1.01g、丹参酮ⅡA中剂量组27.23±1.60g、丹参酮Ⅱ A高剂量组26.73±1.08g、阿司匹林组26.17±2.08g，与模型组无显著差异(P＞0.05)。阿司匹林组小鼠无死亡;丹参酮ⅡA低、中、高剂量组死亡率分别为2只(16％)、1只(8％)、3只(25％);根据病理结果证实:模型组、丹参酮ⅡA低、中剂量组结直肠腺癌，丹参酮ⅡA高剂量组和阿司匹林组结直肠腺瘤。丹参酮ⅡA组和阿司匹林组小鼠结直肠肿瘤数目及大小较对照组偏低。免疫组化结果显示:丹参酮ⅡA低剂量组BrdU、p-STAT3、COX-2的阳性细胞数为:53.54±7.44％、38.09±6.19％、61.97±7.7％;丹参酮ⅡA中剂量组为:36.58±9.21％、23.62±6.95％、39.77±7.99％;丹参酮ⅡA高剂量组两组为:20.6±4.62％、14.63±5.36％、23.07±8.23％;阿司匹林组为:17.11±3.68％、13.82±6.35％、19.96±4.08％。各药物干预组与模型组比较，BrdU、p-STAT3、COX-2阳性细胞数明显降低，有显著的统计学意义(t＞1.96，P＜0.01)。丹参酮ⅡA高剂量组和阿司匹林组中BrdU、p-STAT3、COX-2阳性细胞数明显降低(P=0.441)，两组之间无显著差异性。
结论:
1.体外培养人肠癌LoVo、HCT-116细胞，丹参酮ⅡA可以抑制其生长，有剂量和时间依赖的特性。
2.AOM/DSS模型可以稳定的诱导小鼠形成炎症性大肠癌，其造模操作简单、成瘤率高，可重复性的模拟人类炎症相关的大肠癌的发生发展过程。
3.丹参酮ⅡA干预组小鼠肿瘤数目显著减少，肿瘤体积显著缩小，肿瘤组织周围可见炎性细胞数降低，说明丹参酮ⅡA可以明显抑制大肠癌发生发展，调控STAT3、COX-2和BrdU的表达，在炎症性大肠癌中抑制炎症反应和肿瘤的增殖，从而起到防治的作用。
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