目的：大量文献报道,生理浓度的糖皮质激素参与中枢海马神经元学习记忆的形成过程,但高浓度糖皮质激素却引起海马神经元结构与功能受损,尤其导致学习记忆形成过程中某些关键基因表达下降,推测这可能是老年机体学习记忆退化的重要原因之一.本文结合近年来有关表观遗传修饰在老年机体学习记忆关键基因表达过程中的重要调控作用,在以往工作基础上,拟进一步观察高浓度皮质酮对海马神经元活性以及学习记忆关键基因糖皮质激素(皮质酮)受体(GR)及锌指蛋白家族成员Zif268表达的影响,并观察皮质酮处理前后参与表观遗传修饰的酶——DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的变化；同时观察补肾中药——熟地之有效成分甘露三糖和补气中药——黄芪之有效成分黄芪甲苷对皮质酮损伤神经元的保护作用.方法：以原代培养新生24hSD大鼠海马神经元为研究对象,神经元培养至第8天,采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)及星形胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色分别观察神经元和胶质细胞数量以评估神经元的纯度.采用CCK8法、FDA/PI荧光染色法观察不同浓度皮质酮作用不同时间对海马神经元存活率的影响,并结合衰老相关β-半乳糖苷酶染色情况确定皮质酮处理海马神经元的浓度和时间,同时观察甘露三糖和黄芪甲苷对神经元的保护作用.利用western blot法检测皮质酮处理前后GR/Zif268/DNMT1蛋白表达.结果：与对照组比较,皮质酮能够呈时间剂量依赖性的降低神经元存活率；0.1mM,0.2mM和0.4mM甘露三糖均可以显著增加皮质酮损伤神经元的存活率(p＜0.01)；0.1uM、1uM、10uM黄芪甲苷也能不同程度地提高海马神经元的存活率(p＜0.01)；高浓度皮质酮能够下调海马神经元GR、zif268及上调DNMT1的表达.结论：高浓度皮质酮能够降低海马神经元存活率,下调学习记忆关键分子GR和zif268蛋白的表达,并且能够上调参与DNA甲基化修饰过程的DNMT1酶蛋白的表达.由此可见,高浓度皮质酮对海马神经元产生了一定的损伤作用,影响了DNMT1和GR和Zif268蛋白的表达,进而学习记忆的形成和LTP的建立；而甘露三糖和黄芪甲苷对高浓度皮质酮损伤的海马神经元具有保护作用,有利于改善学习记忆的形成,但其详细机制有待进一步探明.
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