目的:探究和比较了黄芪、麦冬和灵芝多糖对小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞和树突状细胞(DC)免疫调节功能的影响。
方法:1.采用DEAE-32纤维素阴离子交换层析和凝胶过滤层析对黄芪、灵芝和麦冬多糖提取物进行了分离纯化并测定其单糖组成和分子量;2.细胞活力实验检测了黄芪多糖(APSⅡ)、灵芝多糖(GLPⅡ)和麦冬多糖(OGPⅡ)对Raw264.7活力的影响。3.测定了APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ对Raw264.7细胞产生一氧化氮(NO)的影响;4.讨论了APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ对Raw264.7细胞吞噬能力的影响并探讨了NO与Raw264.7细胞吞噬之间的关系;5.流式细胞仪检测了APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ对Raw264.7细胞表面抗原表达的影响;6.采用高通量活细胞成像系统和透射电子显微镜观察了APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ对Raw264.7细胞形态变化的影响;7.建立了人外周血来源、猪外周血来源和小鼠骨髓来源的DC细胞的体外诱导培养模型;8.初步观察了APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ对小鼠骨髓来源的DC细胞成熟的影响。
结果:HPGPC检测了APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ的纯度并测定其分子量，三种多糖分子量分别为11.4KDa，15.1 KDa和10.7 KDa; GC-MS分析APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ的单糖组成，发现APSⅡ主要含有葡萄糖、木糖以及少量的阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和半乳糖，GLPⅡ主要有葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，并且含有少量的鼠李糖、木糖和甘露糖，而OGPⅡ主要含有葡萄糖;APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ均能够增加Raw264.7细胞活力并且呈浓度依赖性;APSⅡ和GLPⅡ都能够诱导Raw264.7细胞产生NO并具有浓度依赖性，而OGPⅡ对细胞产生NO影响并不明显;采用荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)检测Raw264.7细胞的吞噬能力，发现APSⅡ和GLPⅡ能引起细胞吞噬能力的上升并有浓度依赖效应，而OGPⅡ在影响细胞吞噬能力方面不明显;在抑制了Raw264.7细胞产生NO之后，检测到细胞吞噬能力减弱，提示了NO能够促进Raw264.7细胞吞噬能力;Raw264.7细胞形态学观察发现APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ能够诱导其分化成为DC样细胞，其中，GLPⅡ诱导其分化的能力最强，APSⅡ次之，OGPⅡ的效果最不明显;建立了一个Raw264.7细胞定量分析细胞分化的模型，应用该模型，评价了三种多糖对Raw264.7细胞的免疫调节能力，结果同上述一样;Raw264.7细胞表面抗原检测发现，APSⅡ和GLPⅡ能够促进MHCⅡ、CD40和CD80/86的表达，而OGPⅡ刺激效果不明显;成功建立了体外诱导和培养人外周血来源、猪外周血来源和小鼠骨髓来源的DC细胞的模型;APSⅡ、GLPⅡ和OGPⅡ能够刺激其成熟，DC细胞表面抗原MHCⅡ、CD40和CD80/86表达上升，其中GLPⅡ效果最为明显。
结论:结合细胞活力、NO含量、细胞吞噬能力和细胞分化以及细胞表面抗原变化等评价指标发现GLPⅡ在激活Raw264.7巨噬细胞和DC细胞的免疫调节能力要比APSⅡ和OGPⅡ强;高通量筛选系统是现代对大量化合物进行药理活性评价的一种重要工具，在创新药物的研究和开发中发挥了重要作用。
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