目的:近年来,胃癌的发病率呈逐年上升的趋势。在胃癌发生的众多因素中,幽门螺杆菌(H.pylor,Hp)占重要地位,目前国际癌症中心已将Hp列为胃癌的一类致癌因子,但Hp导致胃癌的机制尚不明确。本课题组前期研究发现,miR-30a在Hp感染人胃癌细胞中的表达显著下调,提示miR-30a起到抑癌因子的作用,但其发挥抑癌作用的机制尚不清楚。本研究旨在揭示miR-30a抗Hp感染人胃癌的作用机制,并探讨中医经方左金丸通过影响miR-30a的表达调控Hp诱发人胃癌的机理。
方法:构建BCL9基因3'UTR区荧光素酶报告质粒,双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a对BCL9基因3'UTR区荧光素酶活性的影响;荧光定量PCR、western blot检测miR-30a对BCL9 mRNA和蛋白表达的影响。
采用瞬时转染技术对Hp感染人胃癌MKN45细胞转染miR-NC、miR-30aminics和miR-30a inhibitor,流式检测miR-30a对MKN45细胞凋亡的影响;Transwell检测miR-30a对MKN45细胞侵袭和迁移能力的影响。
采用流式检测左金丸对Hp感染胃癌MKN45细胞周期、凋亡的影响;Hoechst染色观察左金丸对MKN45细胞凋亡形态的影响;Transwell检测左金丸对MKN45细胞侵袭和迁移能力的影响。
荧光定量PCR检测左金丸对Hp感染MKN45细胞miR-30a表达的影响;Western blot检测左金丸对MKN45细胞BCL9蛋白表达的影响;免疫荧光染色法检测左金丸对MKN45细胞β-catenin核移位的影响。
结果:miR-30a可降低BCL9基因3'UTR区的荧光素酶活性,下调BCL9mRNA和蛋白的表达;miR-30a可促进Hp感染人胃癌MKN45细胞的凋亡,抑制其侵袭和迁移能力;左金丸可影响Hp感染MKN45细胞的周期,并将其阻滞在S期和G2/M期;左金丸可促进Hp感染MKN45细胞的凋亡,且具有剂量依赖性;左金丸可抑制Hp感染MKN45细胞的侵袭和迁移能力;左金丸可抑制Hp感染MKN45细胞β-catenin的核移位。
结论: miR-30a可通过与BCL9基因3'UTR区碱基的互补结合而抑制BCL9基因的表达。左金丸可通过上调Hp感染人胃癌MKN45细胞中miR-30a的表达而抑制BCL9基因的表达,进而抑制3-catenin核移位引起的Wnt/β-catenin信号通路的激活,最终起到抗Hp感染诱发胃癌的作用。