目的:中药单体苦参碱是中药山豆根及苦参的主要质量指标成分,具有广泛的药理活性作用,曾有报道该成分有肝毒性作用.本研究采用肝细胞L-02,观察苦参碱对肝细胞L-02的毒性作用特点,并初步探索其毒性作用机制,从而为苦参碱的临床安全用药研究提供实验基础. 方法:将生长状态良好的肝细胞用胰酶消化,离心、重悬、计数,调整细胞密度为1×106个/ml,接种于6孔板,5％CO2培养,MTT法绘制生长曲线.待细胞贴壁后,选择对数生长期进行药物干预.分别设阴性对照组,苦参碱3.2mmol/L组,8.1mmol/L组,20.2mmol/L组,每组5个复孔.作用24h后于倒置显微镜观察细胞生长情况,MTT法计算IC50;收集培养液,用日立7100全自动生化分析仪测定各组ALT、AST、ALP、LDH值;用细胞爬片技术进行细胞HE染色,光学显微镜观察肝细胞形态变化;用DAPI染色法观察细胞凋亡的变化.Elisa法测定细胞MDA和GSH的含量. 结果:苦参碱对肝细胞L-02的生长具有一定的抑制作用,在3.2-20.2mlM/L浓度范围内呈浓度.毒性依赖关系,IC50为5.3mM/L;与阴性对照组相比,苦参碱高浓度组肝细胞L-02分泌的ALT、AST、ALP和LDH增高(P＜0.05),在3.2-20.2mM/L浓度范围内呈浓度依赖关系:苦参碱高浓度可使肝细胞L-02形态发生改变,部分肝细胞肿大、细胞核消失:与阴性对照组相比,苦参碱高浓度组肝细胞L-02中MDA含量增高(P＜0.05),GSH含量降低(P＜0.05);DAPI染色法检查结果显示苦参碱高浓度能使部分肝细胞L-02细胞核破裂,呈凋亡状态。 结论:高浓度的苦参碱对肝细胞L-02具有一定的毒性作用,能抑制其生长,细胞培养液ALT、AST、ALP、LDH增高,肝细胞的形态发生改变;初步研究显示,对肝细胞的毒性机制可能与过氧化反应及细胞凋亡有关.
(8.0+极速模式)