目的:
本文以海洋生物沙蚕科动物双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis(Grube，1878)为研究对象，采用现代分离纯化技术，得到一种活性高、成分单一的纤溶活性蛋白酶。采用SDS-PAGE、HPLC法对其纯度进行鉴定，SDS-PAGE、MALDI-TOF/TOF进行分子量测定，等电聚焦法测定其等电点。通过其药效活性进行初步研究，为阐明双齿围沙蚕药效物质基础、开发创新溶栓型药物奠定基础。
方法与结果:
(1)双齿围沙蚕纤溶蛋白酶的分离纯化
双齿围沙蚕干品经Tris-HCl缓冲液浸提得到的粗酶溶液采用硫酸铵分级盐析、Sephadex-G75凝胶过滤层析、Sephadex-G10凝胶过滤层析、DEAE SepharoseFast Flow离子交换层析、PAGE凝胶制备、HPLC凝胶色谱制备等分离纯化的方法，得到了达到电泳纯且经HPLC凝胶色谱检测纯度达到95％以上的双齿围沙蚕纤溶蛋白酶。
(2)双齿围沙蚕纤溶蛋白酶的分子特征及酶学特性研究
采用SDS-PAGE测定双齿围沙蚕纤溶蛋白酶表观分子量为33.03kDa、MALDI-TOF/TOF分别测得相对分子量为25.18kDa;聚焦等电点测得其等电点为5.28;通过Tripe TOF5600 Plus LC-MS/MS串联质谱仪对纯化的蛋白酶进行DeNovo测序，得到了四个肽段的氨基酸序列:ATTM(oxidation)YEAAAR、ATYLGM(oxidation)VTGLGTSGNK、YTSAGYSVAGTHR、AFAGLDSSGLDGVAATK。
双齿围沙蚕纤溶蛋白酶性质的研究:双齿围沙蚕纤溶蛋白酶是一种特殊的丝氨酸类蛋白酶，其活性不能被抑肽酶（Aprotinin）和胰蛋白酶抑制剂(trypsininhibitor)抑制，但能被苯甲基磺酰氟PMSF完全抑制;具有良好的pH稳定性与热稳定性，在pH10，60℃时酶活性最大;金属Co2+对其有一定的影响，其它离子对酶活性均无明显作用;主要直接水解纤维蛋白，能依次水解纤维蛋白原的Aα链、Bβ链和γ链;其特异性发色底物为S-2251。
(3)双齿围沙蚕纤溶蛋白酶的药效学初步研究
通过体外血块溶解实验、体外抗凝实验、优球蛋白溶解实验，发现双齿围沙蚕纤溶蛋白酶具有溶解血块、优球蛋白与抗凝作用。
通过采用FeCl3溶液覆盖法建立新西兰兔颈动脉血栓模型，比较各组给药后血栓的溶解情况，结果表明双齿围沙蚕纤溶蛋白酶对兔颈动脉血栓具有溶解作用。
结论:
本文建立了双齿围沙蚕纤溶蛋白酶的制备纯化工艺，方法简便、重复性好;通过对双齿围沙蚕纤溶蛋白酶的分子量、等电点及酶学特性研究，采用Denovo法对部分肽段解析，确定其为一种特殊的新型丝氨酸蛋白酶，且分子量与其它动物来源纤溶酶接近;通过药效学初步研究，发现双齿围沙蚕纤溶蛋白酶具有纤溶活性，是具有开发前景的海洋药物，研究工作为阐明双齿围沙蚕药效物质基础、开发新型溶栓药物奠定了基础。
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