马齿苋为马齿苋科植物马齿苋Portulaca oleracea L.的干燥地上部分,具清热解毒,凉血止血之功效。现代研究表明,马齿苋含有黄酮、生物碱、多糖、有机酸等活性成分。马齿苋临床治疗慢性尿路感染取得了较好的疗效,研究显示其物质基础为具有较强抗菌、抗病毒活性的总黄酮。本文研究了药材的质量、总黄酮提取及分离纯化工艺;优化了片剂的制备工艺,并对其质量标准及稳定性进行研究,为开发研究治疗慢性尿路感染新药提供理论与实验依据。
对不同产地的药材进行了性状、显微、理化和薄层鉴别,水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及含量测定。建立了药材中总黄酮的UV含量测定方法,测定波长509 nm,芦丁对照品在0.16～0.80 mg/ml范围内,线性关系良好(r=0.9992);样品平均回收率99.85％(RSD=0.80％)。此外,建立了药材中槲皮素和山萘酚的HPLC含量测定方法,色谱柱:Kromasil(C-18柱250×4.6 mm,5μm、J;检测器:DAD;流动相:甲醇-0.4％磷酸水溶液(55:45);流速:1.0 mL·min-1;检测波长:369 nm;柱温:35℃。槲皮素进样量在2.71～21.68 ng(r=0.9997),山奈酚进样量在2.73～21.84ng(r=0.9998)范围内线性良好,样品平均回收率分别为94.27％、93.50％,RSD分别为2.06％、1.15％。
采用脱脂--醇提水沉法,设计L9(34)正交试验,优化的总黄酮提取工艺为:以8倍量石油醚脱脂2 h,再以6倍量70％乙醇提取2次,每次1.5 h,滤液浓缩至无醇味,加入8倍量水,冷藏使沉淀,上清液浓缩。
采用大孔吸附树脂法,优化的总黄酮富集工艺为:选用D-101树脂,上样浓度0.05g/ml,最大上样量9 BV,吸附流速1.0 ml/min,9 BV 70％乙醇洗脱,洗脱流速1.0 ml/min,提取物含量达50％以上。
以崩解时间和硬度为评价指标对处方工艺进行筛选,得到片剂的处方组成为:马齿苋提取物80 g、糊精84.3 g、乳糖42.2 g、微晶纤维素42.2 g、5％聚维酮适量,硬脂酸镁1.25 g,压制成1000片。
建立了片剂的质量标准,包括常规质量检查及含量测定。对片剂进行溶出度测定,采用自身对照,转篮法,溶出介质为水,转速100 rp/min,温度37℃,采用UV测定含量,测定波长283 nm,相对溶出量和吸光度的线性关系良好(r=0.9996),片剂90min累积释放92.66％。对片剂的UV含量测定进行方法学考察,测定波长509 nm,芦丁对照品在15.87～79.36μg/ml范围内,线性关系良好(r=0.9990),样品低、中、高浓度平均回收率分别为98.94％、98.19％、99.42％,片剂平均含量为15.24％。
考察了片剂的长期与加速稳定性,结果其外观性状、溶出度和含量均未发生明显变化,表明稳定性良好。
(8.0+极速模式)