目的:
随着生活水平的提高和生活方式的改变，近年我国结直肠癌发病率明显增高。结直肠慢性炎症刺激局部炎症组织反复损伤、修复、增生，最终引起癌变。因此，研究如何干预结直肠慢性炎症癌变成为降低结直肠癌发病率的重要手段。本文探讨三七皂苷R1减轻小鼠实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)及UC相关性结直肠癌(ulcerative colitis-related colorectal cancer，CRCC)的药效作用，及其对炎症信号通路和细胞凋亡通路的影响，为三七皂苷R1的进一步药理研究和开发提供实验依据。
方法:
1.用化学诱导剂葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）诱导建立小鼠实验性UC动物模型，从体重、血便、结肠形态学和结肠长度、结肠组织病理学和评分等指标，评价三七皂苷R1改善小鼠实验性UC模型的药效作用。
2.ELISA方法检测小鼠结肠黏膜MPO活性及TNF-α和IL-6的水平，评价三七皂苷R1的体内抗炎活性。
3.实时荧光定量PCR检测小鼠结肠组织炎症介质基因mRNA的表达，评价三七皂苷R1的体内抗炎活性。
4.Western Blot方法检测小鼠结肠组织NF-κB信号通路蛋白的表达，评价三七皂苷R1对NF-κB活性的影响。
5.Griess法检测LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞NO的分泌水平，评价三七皂苷R1的体外抗炎活性。
6.半定量PCR检测LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症介质基因mRNA的表达，评价三七皂苷R1的体外抗炎活性。
7.在小鼠实验性UC模型基础上，加化学致癌剂氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)建立小鼠实验性UC相关性结直肠癌(CRCC)动物模型，从体重、血便、结肠形态学和结肠长度、结肠组织病理学和评分、结肠肿瘤大小及数量、脾重等指标，评价三七皂苷R1改善小鼠实验性CRCC模型的药效作用。
8.免疫组织化学染色观察小鼠结肠组织P53、PCNA、COX-2的表达，评价三七皂苷R1的体内抗癌活性。
9.CCK-8方法检测8种人结肠癌细胞及1种小鼠结肠癌细胞的增殖活性，评价三七皂苷R1对结肠癌细胞凋亡的影响。
结果:
1.小鼠实验性UC模型的药效学研究显示:三七皂苷R1能明显抑制UC小鼠体重减轻、结肠缩短和腹泻便血的发生，并可改善小鼠肠道炎性细胞浸润和组织病理损伤等症状。
2.ELISA结果显示三七皂苷R1可以抑制UC小鼠结肠组织中MPO的表达和TNF-α、IL-6的分泌;实时荧光定量PCR结果显示三七皂苷R1可以降低UC小鼠结肠组织中炎症介质mRNA的表达;Western Blot结果显示三七皂苷R1可以抑制UC小鼠结肠组织NF-κB信号通路中关键蛋白的磷酸化;LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞体外炎症模型显示，三七皂苷R1可以降低NO的分泌和炎症介质mRNA的表达。
3.小鼠实验性CRCC模型的药效学研究显示:三七皂苷R1能明显抑制CRCC小鼠体重减轻、脾脏肿大、结肠缩短、肿瘤大小及数量和腹泻便血脱肛的发生，并可改善小鼠肠道炎性细胞浸润，减少管状腺瘤发生。
4.免疫组织化学染色结果显示:三七皂苷R1可以降低CRCC小鼠结肠组织中P53、PCNA、COX-2的表达;CCK-8结果显示:三七皂苷R1对多种结肠癌细胞的凋亡无影响。
结论:
1.三七皂苷R1可显著改善小鼠实验性UC模型的病理症状，其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活和抑制炎性浸润及炎症介质的分泌有关。
2.三七皂苷R1可以显著抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞中NO的分泌和炎症介质基因的表达，从而在细胞水平上进一步验证了三七皂苷R1的抗炎活性。
3.三七皂苷R1可显著改善小鼠实验性CRCC模型的病理症状，减少肿瘤的发生、增长和数量，其作用机制可能与抑制癌基因的表达有关。
4.三七皂苷R1对结肠癌细胞的凋亡无影响，提示三七皂苷R1可能通过抗炎途径和体内抗癌途径来抑制结肠癌的发生。
(8.0+极速模式)