目的:
防己黄芪汤出自我国医圣张仲景的《金匮要略》，具有益气祛风、健脾利水之功效，主治因肺脾气虚，卫气不足所致的风水、风湿证，临床上常用于治疗慢性肾小球肾炎、心源性水肿、风湿性关节炎等疾病。作为治疗风水、风湿属表虚证的经典方剂，历经千年应用经久不衰，与其独到的配方用药相关。本课题对防己黄芪汤进行体内外多成分分析，并开展与防己黄芪汤功用相关的免疫方面的药效学研究，以诠释该方主要药效物质基础、免疫抑制作用及信号通路，为其深入开发研究及临床合理应用提供实验依据。
方法:
采用液质联用(UPLC-MS/MS)技术建立对防己黄芪汤中多成分同时测定的分析方法，对复方进行多成分表征;建立对防己黄芪汤在SD大鼠体内主要入血成分进行定量的UPLC-MS/MS生物样品分析方法，检测经灌胃给予低、中、高三个剂量的防己黄芪汤和粉防己碱后，入血成分在不同时间点的血药浓度，运用Kinetica4.4TM药代动力学软件拟合药时曲线并计算各个成分的药动学参数，比较复方给药和粉防己碱单体给药的药代动力学特征差异;利用刀豆蛋白A(ConA)诱导T淋巴细胞增殖，观察给药后防己黄芪汤对增殖的T淋巴细胞的作用，并探讨其可能的作用机制。
结果:
(1)建立了灵敏度高、分析质量可靠、分析效率高且能对防己黄芪汤复方中多成分同时测定的UPLC-MS/MS分析方法，并应用于防己黄芪汤中的生物碱类（木兰花碱、防己诺林碱和粉防己碱）、皂苷类（黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ和甘草次酸）、黄酮类（毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素）和萜类（白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅱ）共18种成分的定量分析研究，其中粉防己碱为防己黄芪汤复方中含量最高的生物碱。
(2)建立了对防己黄芪汤在SD大鼠体内7种主要入血成分进行检测的UPLC-MS/MS方法，并应用于防己黄芪汤和粉防己碱的低、中、高3个剂量的药代动力学研究。研究结果表明在防己黄芪汤在大鼠体内主要入血成分为粉防己碱、防己诺林碱、木兰花碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、黄芪甲苷和甘草次酸。不同剂量给药时，除防己诺林碱外，其它几分成分在体内的吸收(AUC)具有剂量依赖性趋势。观察各成分的药代动力学参数，结果显示粉防己碱、防己诺林碱、甘草次酸和黄芪甲苷在体内吸收速率慢、消除速率慢、驻留时间长(Tmax＞9 h，MRT＞5 h，CL＜8 L/h/kg);木兰花碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和甘草苷在体内具有吸收速率和消除速度快，体内驻留时间短的特点(Tmax＜1h，MRT＜5h，CL＞50 L/h/kg)。与单一成分给药相比，复方中的粉防己碱的吸收程度(AUC)增加(p＜0.05），而消除速率降低(p＜0.05)，表明方中其它成分对粉防己碱的吸收有促进作用，对消除有减缓作用。
(3)考察了防己黄芪汤对辅助性T细胞分化过程的作用，结果表明防己黄芪汤对T淋巴细胞的增殖具有明显的抑制作用，且防己黄芪汤和粉防己碱均能够显著性降低细胞上清液中促炎因子IL-2、IL-17和INF-γ的含量(p＜0.01），增加细胞上清液中免疫抑制因子IL-10的含量，增加转录激活因子STAT5的磷酸化水平（（p＜0.05）），CD4+CD25+ Foxp3 Treg细胞的分化数量(p＜0.05))及转录因子Foxp3的表达（（p＜0.05）），提示防己黄芪汤可能通过促进Treg细胞增殖分化，从而发挥抑制T淋巴细胞增殖的作用。
结论:
研究结果表明防己黄芪汤发挥药效的物质基础趋于多元化，种类多样、含量各异，因此选择多个成分进行控制才能较全面的对复方进行质量评价;方中君药的特征成分为该方的主要入血成分。君药防己含有的粉防己碱与复方中其他成分之间存在着协同作用，具有免疫抑制作用的粉防己碱在复方中的生物利用度显著提高，显示了该方组方的合理性;防己黄芪汤可抑制T淋巴细胞的增殖，其作用机制可能是该复方通过调节Treg细胞的增殖分化过程，使免疫活化和分化受到影响，从而产生免疫抑制作用，复方中的粉防己碱在此过程发挥重要作用。
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