[1]上海中医药大学科技实验中心
目的建立一种快速、早期的中药胚胎毒性的快速检测技术,用于中药的早期胚胎毒性筛选。方法 (1)血清制备:SD大鼠随机分为阳性对照组4只,正常组4只,雄黄组、朱砂组各3只。阳性对照组给予环磷酰胺10 mg/kg,正常组用0.5%CMC-Na灌胃给药,雄黄组和朱砂组分别将雄黄和朱砂(用0.5%CMC-Na稀释)按1.0 ml/100 g灌胃给药。末次给药后1 h,无菌取血并取上清血清;(2)细胞采集:4～6周雌性C57小鼠,用妊娠孕马血清(PMSG)腹腔注射,48 h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(h CG),合笼交配。第2天检查阴栓,用M2培养液将2细胞胚胎从输卵管中冲出,用M16培养液进行培养;(3)毒性试验:在胚胎2细胞阶段加入正常组、阳性对照组、雄黄组及朱砂组不同稀释比血清,观察囊胚成活率。结果在1∶4、1∶16、1∶32的稀释比下,正常组的囊胚率为60.00%、73.33%、93.33%,高于阳性对照组的46.67%、60.00%、66.67%;朱砂组血清各个稀释比的囊胚率均未达到80%;除1∶512这个稀释比外,雄黄组血清各个稀释比2细胞胚胎的囊胚率均未达到80%。结论 (1)朱砂和雄黄的大鼠含药血清在一定浓度时,对小鼠2细胞胚胎的生长发育有一定的影响,呈现中药的胚胎毒性;(2)小鼠胚胎2细胞用于中药的早期胚胎毒性筛选方法是可行的。
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