目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂——伏立诺他(SAHA)干预骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1细胞对自噬水平与先天免疫中的Toll样受体表达水平的影响。方法将SKM-1细胞分为空白组(不加任何干预)、Toll样受体(TLR)诱导剂组(三酰脂肽300 ng·m L~(-1))、TLR抑制剂组(氧化磷脂30μg·m L~(-1))、HDAC诱导剂组(曲古抑菌素A1抑制剂100μmol·L~(-1))、HDAC抑制剂组(SAHA 2. 5μmol·L~(-1))、自噬诱导剂组(西罗莫司2. 5μmol·L~(-1))、自噬抑制剂组(选择性磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂15μmol·L~(-1)),加药培养24h。用流式细胞仪检测细胞自噬水平;用实时定量-聚合酶链反应和免疫印迹法检测各药物干预后HDAC1、TLR2、自噬经典信号通路[磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)]以及自噬相关指标[自噬相关蛋白6(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)]的mRNA和蛋白水平。结果 SKM-1细胞经处理后,自噬诱导剂组、HDAC诱导剂组、自噬抑制剂组与空白组的自噬水平(流式荧光强度)分别为92. 9±4. 54,6. 58±1. 01,34. 10±3. 18,34. 00±2. 10; HDAC抑制剂组、TLR抑制剂组与空白组的自噬水平(流式荧光强度)分别为71. 00±10. 00,57. 60±3. 10,34. 00±2. 10; HDAC抑制剂组的PI3K、AKT、m TOR的mRNA表达水平分别为0. 26±0. 04,0. 20±0. 03,0. 40±0. 07,空白组相应的分别为1. 00±0. 18,1. 00±0. 16,1. 00±0. 18; HDAC抑制剂组的PI3K、AKT、m TOR的蛋白表达水平与基因表达水平的趋势一致;同时,HDAC抑制剂组与空白组的TLR2的mRNA表达水平分别为0. 30±0. 03,1. 00±0. 16;这2组的TLR2的蛋白表达水平为0. 72±0. 05,1. 00±0. 16。各个给药组与空白组比较,上述所有指标的差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 SAHA在PI3K/AKT/m TOR通路上调控SKM-1细胞自噬水平,并可能通过抑制HDAC1与TLR2表达水平增加细胞自噬。
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