目的:基于泛素-蛋白酶体通路探讨宣肺化瘀方(XFHY)防治大鼠肺纤维化的作用机制。方法:将60只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为6组,即阴性对照组、模型组、醋酸泼尼松组、XFHY高剂量组、XFHY中剂量组、XFHY低剂量组。除阴性对照组外,均经鼻滴入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型。XFHY高、中、低剂量组大鼠分别每日灌胃XFHY14.38 g/kg、7.19 g/kg、3.60 g/kg,醋酸泼尼松组大鼠每日剂量为0.167 mg/kg,模型组和阴性对照组给予等体积的0.9%Na Cl溶液灌胃。各组均灌胃28 d。处死大鼠,通过肺组织HE染色和天狼猩红染色鉴定模型。采用碱性水解法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;采用Power Lab测定肺功能;应用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中TGF-β1含量;应用Western blot检测肺组织Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达。结果:HE染色和天狼猩红染色结果显示,肺纤维化模型组肺组织可见大量胶原纤维沉积,宣肺化瘀方各剂量组肺泡间隔胶原纤维表达明显减少。与阴性对照组比较,模型组HYP含量及BALF和肺组织中TGF-β1含量显著升高,而平均呼气峰流量(PEF)和每分钟通气量(MV)显著降低,Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,XFHY各剂量组胶原纤维表达和HYP含量均显著下降,其中XFHY高剂量组比XFHY低剂量组和中剂量组胶原纤维表达更少(P<0.05),HYP含量更低(P<0.01,P<0.05);而XFHY各剂量组PEF和MV均有所升高,其中,XFHY高剂量组比XFHY低剂量组和中剂量组更高(P<0.01,P<0.05);XFHY高剂量组BALF和肺组织中TGF-β1含量显著降低,而Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:宣肺化瘀方能有效防治肺纤维化,其机制可能是通过激活泛素-蛋白酶体通路、降低BALF和肺组织中TGF-β1的蛋白含量,从而减少胶原纤维形成。
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