采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化后进行HPLC分析。采用Ultimate Prime C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A 0.1 mol·L-1醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93∶7),流动相B乙腈-水(8∶2);流速1.0 mL·min-1;柱温40℃;检测波长254 nm;梯度洗脱。氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,16种氨基酸线性相关系数均大于0.999 5,加样回收率在98.01%~101.8%。该方法操作简便,精密度和重复性良好,可用于鸡内金中16种水解氨基酸含量的测定。