目的探讨内质网应激和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号在蛋氨酸-胆碱缺乏饮食(MCDD)诱导的非酒精性脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡中的作用。方法 (1)MCDD喂养10周诱导非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型(M组),恢复组(R组)于第9周开始将MCDD转变为蛋氨酸-胆碱对照饮食(MCCD)喂养2周;(2)评价肝细胞脂肪变性、纤维化和炎性反应程度,采用免疫组织化学、蛋白印迹或real time-PCR(RT-PCR)方法评价肝星状细胞活化;(3)采用4-羟基壬烯酸(4-HNE)、HO-1/2免疫组织化学、蛋白印迹或RT-PCR方法评价肝细胞氧化损伤;(4)肝细胞凋亡采用TUNEL染色法评价;(5)采用RT-PCR及蛋白印迹方法评价内质网应激相关细胞因子ERP78、caspase-12、caspase-7、cleaved caspase-7、caspase-9、easpase-3、cleaved caspase-3,以及MAPK信号相关细胞因子c-Jun、ERK1/2、p-ERK1/2。结果 MCDD转换为MCCD后,肝细胞脂肪变性、炎性反应、氧化损伤及肝纤维化程度明显减轻。与正常组比,M组ERP78、caspase-12、caspase-7、cleaved caspase-7蛋白表达均显著增加(P<0.05或<0.01),RT-PCR分析显示ERP78、caspase-12、caspase-7 mRNA表达水平亦显著增加(灰度值分别为3.03±0.41比2.12±0.37,1.86±0.36比0.78±0.20,2.38±0.19比1.84±0.13,P<0.05或<0.01)。但caspase-3、cleaved easpase-3蛋白表达以及caspase-3、caspase-9mRNA表达在正常组、M组和R组之间差异无统计学意义(P>0.05);M组与正常组比c-Jan mRNA表达升高(0.19±0.03比0.11±0.05,P<0.05),R组降低(与M组相比,0.13±0.04比0.19±0.03,P<0.05);ERK1和p-ERK1蛋白表达在M组均升高(P<0.01),R组均降低(与M组比,P<0.01)。结论内质网应激相关的caspase-12凋亡途径可能不是非酒精性脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡的主要机制,而MAPK信号可能在该模型肝细胞凋亡中发挥重要作用。
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